This paper reports the results of a diagnostic evaluations by PCR for hemotropic agents in buffalo and cattle (n=77), existing in the same farm. There was a positivity of 74.03% of hemoparasite infection for the total population studied, prevailing Anaplasma marginale on Trypanosoma theileri, Trypanosoma vivax and Babesia bigemina, respectively. Additionally, some DNA problems were tested by DGGE, revealing the presence of A. marginale and Mycoplasma wenyonii. The results obtained confirm a presumptive clinical situation and the validity of the molecular method.

La siguiente investigación presenta los resultados de las evaluaciones diagnósticas, realizadas por PCR, para agentes hemotrópicos, en ganado bufalino y bovino (n=77), coexistentes en una misma explotación agropecuaria. Se obtuvo una positividad de 74,03% de infección hemoparásita para el total de la población estudiada, con predominio de Anaplasma marginale sobre Trypanosoma theileri, Trypanosoma vivax y Babesia bigemina, respectivamente. Adicionalmente, algunos de los ADN problema fueron ensayados por DGGE, revelando la presencia de A. marginale y Mycoplasma wenyonii. Los resultados obtenidos corroboran la clínica presuntiva y el valor del método molecular.

Se registra un brote de enfermedad de Chagas agudo, en una localidad rural de Mérida-Venezuela, asociado con transmisión oral por ingesta contaminada con Trypanosoma cruzi dada la masiva y simultanea infección detectada en 5 miembros de una familia. La masiva transmisión de T. cruzi generó cuadros clínicos severos causando miocarditis aguda en 2 pacientes (40%) incluyendo un caso fatal. La severidad clínica en todos los pacientes involucrados mostró correspondencia con los hallazgos parasitológicos, serológicos y moleculares (PCR) con los cuales se evidenció presencia de tripomastigotes sanguícolas de T. cruzi, anticuerpos anti-T. cruzi con niveles variables de IgM e IgG específicas y ADN de T. cruzi, respectivamente. Asimismo, el perfil clínico reveló 17 signos o síntomas con un promedio por paciente de 12±3 (rango=9-16) con simultaneidad en 8 de los síntomas más frecuentemente detectados. Resalta en la sintomatología la presencia de edema facial interno con manifiesta tumefacción y parestesia lingual en ausencia del cuadro típico de edema bipalpebral (signo de Romaña) y/o chagoma de inoculación comúnmente registrados en la infección chagásica por vía vectorial. Se argumenta la posibilidad de la transmisión oral y se discute la potencial importancia epidemiológica del presente hallazgo.

An acute Chagas disease outbreak associated with oral transmission, detected in a rural village of Merida- Venezuela, is reported. The massive transmission due to ingestion of food contaminated with Trypanosoma cruzi generated, in 5 members of the same family, severe clinical features causing acute myocarditis in two of them (40%) including a fatal case. Parasitological, serological and molecular (PCR) examination of samples from the 5 patients involved in the outbreak, revealed T.cruzi blood circulating tripomastigotes, anti-T. cruzi specific antibodies (IgM; IgG) and the presence of T. cruzi respectively. The recorded clinical pattern detected a total of 17 signs or symptoms with an average ± SD 12±3 per patients (range = 9-16) showing simultaneity in 8 symptoms and a 20% mortality. A remarkable characteristic detected during the study was the presence of internal facial swollen with paresthesia in tongue in absence of the typical Romaña's sign or chagoma commonly found in Chagas disease-infection caused by vector transmission. The possible oral transmission and the potential of the findings from the epidemiological viewpoint are discussed.

Se registra un estudio epidemiológico sobre leishmaniasis visceral (LV) llevado a cabo en localidades de la región semiárida noroccidental de Venezuela, donde previamente se había detectado casos activos de esta dolencia. Un total de 1036 individuos sin manifestaciones clínicas aparentes (SMCA) domiciliados en 25 localidades, y 67 perros, de 8 localidades, fueron examinados por métodos serológicos (TAD, IFI, ELISA) y ensayos de PCR. Los resultados revelan una seropositividad a la presencia de anticuerpos circulantes anti-Leishmania infantum (=L. chagasi) del 16,9% y 76,1% en humanos asintomáticos y perros, respectivamente. Los hallazgos serológicos fueron corroborados por la reactividad a la prueba de PCR, arrojando valores de 17,7% en humanos y 29,9% en caninos. Se demuestra la alta prevalencia de infecciones inaparentes por L. infantum en individuos asintomáticos, resultando más frecuentes y ampliamente distribuidas que las infecciones activas. Se discute su rol en la dinámica de transmisión de la LV. Se propone considerar el perro como factor importante en el mantenimiento de L. infantum como fuente de infección humana, corroborando su rol de reservorio de LV en el semiárido venezolano. Se identifican 12 especies flebotominas entre 6000 especímenes colectados en 12 localidades, detectándose un franco predominio de Lutzomyia evansi (66,6%) sobre Lu. longipalpis (14,9%). Se detecta en ambas especies infección natural por L. infantum, utilizando ensayos de PCR. Se concluye que la asociación de personas con LV, activas o SMCA; perros infectados con L. infantum y Lu. evansi, presente en todas las localidades; aunada a las pobres condiciones sanitarias y/o nutricionales, son factores de riesgo suficientes para explicar la alta endemicidad de la LV en la región semiárida del occidente de Venezuela.

An epidemiological study on visceral leishmaniasis (VL) in the semiarid region of western Venezuela, where some acute cases have been previously reported, is recorded. A total of 1036 symptomless people's sera samples from 25 villages, and 67 dogs from 8 different localities, were tested by using 3 different serologic methods (DAT, IFAT, ELISA) and the polymerase chain reaction assay (PCR). Serological tests revealed 16.9% and 76.1% seropositive to Leishmania infantum in asymptomatic humans and dogs, respectively. In addition, a PCR assay detected the presence of L. infantumspecific DNA in 17.7% of the symptomless sampled individuals and in 29.9% of the tested dogs. The combined analyses of serologic and molecular findings demonstrate the presence of subclinical or inapparent VL infections in local people from this part of western Venezuela. The observed prevalence of VL in asymptomatic people is by itself a matter of concern from the epidemiological point of view. The present results also serve to call the attention to the presence of infected dogs as a risk factor in the maintenance of L. infantum as a source for infection to humans in the studied semiarid region. A total of 12 sand fly species were identified from 6000 specimens collected in 12 sampled villages, with a predominance of Lu. evansi (66.6%) over Lu. longipalpis (14.9%). In both sand fly species natural infection by L. infantum was detected using a PCR assay. It is concluded that the association among VL infected people, L. infantum-infected dogs and the presence of Lu. evansi, together with the observed poor sanitary and/or nutritional conditions, are risk factors to explain the high endemicity by VL at the semiarid region of western Venezuela.

Se registra, en un paciente masculino de 48 años, la detección de Leishmania (Viannia) braziliensis en muestra de lesión mucosa crónica con 16 años de evolución clínica. El caso presentado cursa con perforación del tabique nasal no evidenciándose lesión cutánea primaria sugestiva de leishmaniasis. Por su ocupación el paciente ha frecuentado, por largos períodos, bosques en áreas endémicas para leishmaniasis en el occidente de Venezuela. Continuas evaluaciones clínicas, inmunológicas e histopatológicas realizadas durante varios años fallaron en establecer un diagnóstico certero incrementando la severidad del caso. Exámenes recientes realizados en nuestro laboratorio revelan la presencia de amastigotes en muestras de la lesión nasal activa en extendidos coloreados con tinción de Giemsa. La identificación del parásito como L. braziliensis y la verificación de la infección por este parásito en el paciente, fue lograda por ensayos de PCR y Western Blot, respectivamente. Se concluye que el caso presentado sufre una leishmaniasis mucocutánea de vieja data con una baja respuesta inmunológica, a juzgar por la frecuente negatividad en pruebas de IDR y/o la detección de anticuerpos circulantes anti-Leishmania. Se discute sobre la imprecisión diagnóstica en el caso presentado y se advierte sobre el riesgo epidemiológico potencial de casos similares.

The detection of Leishmania (Viannia) braziliensis from a chronic mucosal lesion with 16 years of clinical evolution in a 48 years old male patient is reported. The patient showed destruction of the nasal septal cartilage with no evidence of primary leishmanial lesion. Due to his professional work he frequently visited areas of western Venezuela where leishmaniasis is endemic. Frequent clinical, immunologic and histopathologic evaluations carried out during several years failed to establish a right diagnosis, increasing the severity of the mucosal lesion. The finding of a sparse number of amastigotes in a sample from the mucosal lesion stained by Giemsa stain, suggested a mucosal infection by Leishmania. The identification of the parasite as L. braziliensis and the verification of the infection by this parasite in the reported case were carried out using a PCR assay and a Western Blot test, respectively. It is concluded that the patient was suffering a long-lasting, reluctant to heal and severe lesion with a low immunological response due to infection by L. braziliensis causing mucocutaneous leishmaniasis (MCL). The fail in the diagnosis of this particular case of MCL and the potential epidemiological risk in similar cases are discussed.

Infecciones inaparentes por Trypanosoma cruzi fueron detectadas, por vez primera, en individuos seropositivos asintomáticos muestreados en una comunidad Yukpa del occidente de Venezuela donde no se ha registrado hasta el presente enfermedad de Chagas. De un total de 173 muestras de suero examinadas 24 (13,9%) fueron registradas como seropositivas utilizando tres pruebas serológicas. Análisis complementarios por IFI revelaron bajos niveles de IgM e IgG cuando las muestras de individuos seropositivos asintomáticos fueron comparadas con casos agudos y crónicos incluidos como controles positivos. La totalidad de perros examinados (8) reveló seropositividad, registrándose niveles de IgG similares a los detectados en el grupo humano. La caracterización molecular de un aislado de T. cruzi obtenido de un espécimen silvestre de Rhodnius pictipes reveló la circulación del linaje 1 (DTU1) en el área de estudio. Se discute la importancia de infecciones asintomáticas por T. cruzi y sus implicaciones epidemiológicas en la comunidad indígena estudiada.

Inapparent infections by Trypanosoma cruzi were detected, for the first time, in symptomless seropositive healthy individuals from a Yukpa ethnic community in western Venezuela where Chagas disease had not been previously reported. Seropositivity was detected in 24 out of 173 (13.9%) sera samples taken from asymptomatic people by using three serological methods (DAT, IFAT, ELISA). Complementary analyses by IFAT revealed a low level of anti-T. cruzi specific IgM and IgG in all seropositive people when compared with detected levels in acute and chronic chagasic patients included as positive controls. In addition, 100% of the sampled dogs (8) were seropositive showing a level of anti-T. cruzi IgG similar to that detected in humans. Genotyping of a T. cruzi isolate obtained from an infected wild specimen of Rhodnius pictipes, revealed the circulation of lineage1 (DTU1) in the study area. The importance of the detection of asymptomatic T.cruzi-infections in this indigenous community and its potential epidemiological implications are discussed.

Se detecta la presencia de Anaplasma marginale en becerros hijos de vacas con infección asintomática. Ensayos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) llevados a cabo en muestras de sangre de 31 vacas lactantes, en aparente buen estado físico y sus respectivas crías, revelaron la presencia de ADN específico de A. marginale en el 70 y 40%, respectivamente. La detección de parte del genoma de A. marginale en becerros recién nacidos, hijos de vacas asintomáticas PCR positivas, sugiere la transmisión de la infección madre-hijo por vía transplacentaria. Se discute las implicaciones epizootiológicas de la infección por A. marginale en animales asintomáticos y se advierte sobre la potencialidad de esta forma de transmisión en el mantenimiento del ciclo de este organismo. Se concluye que la transmisión por vía transplacentaria podría ser un evento de frecuente ocurrencia en el área de estudio y se sugiere la utilización de técnicas producto de la nueva biotecnología como la PCR para incrementar la especificidad en el diagnóstico

Un total de 72 aislados de Trypanosoma cruzi obtenidos de diferentes hospedadores y regiones geográficas del occidente de Venezuela, donde la enfermedad de Chagas es endémica, fueron caracterizados genéticamente utilizando marcadores moleculares de los genes ribosomales y del mini-exón. Los aislados fueron obtenidos de fuentes silvestres y domésticas, incluyendo triatominos-vectores, pacientes chagásicos agudos y otros mamiferos. Los resultados mostraron la presencia de los dos linajes reconocidos para T. cruzi (TcI y TcII) en la mayoría de los aislados provenientes de los diferentes hospedadores estudiados. Sin embargo, fue observada una marcada predominancia de T. cruzi I (96%) sobre T. cruzi II (4%). Los presentes resultados sugieren que en el occidente de Venezuela la circulación de aislados de los linajes TcI y TcII es independiente de la fuente biológica de aislamiento y del área geográfica de procedencia, siendo predominante los aislados TcI. Se discute la significación epidemiológica de los presentes resultados.

A total of 72 Trypanosoma cruzi isolates from different hosts and geographical regions of western Venezuela, where Chagas disease is endemic, were typed using ribosomal and mini-exon gene markers. The isolates were obtained from wild, peridomestic and domestic sources including triatomine-bugs, human acute chagasic patients and other mammals. Results showed that T. cruzi two major phylogenetic lineages, T. cruzi I and T. cruzi II were present. However, a remarkable predominance of T. cruzi I (96%) over T. cruzi II (4%) was observed. The present results suggest that in western Venezuela circulation of both T. cruzi I and T. cruzi II isolates is independent from the source of isolation and the geographical area where they occur, with predominance of T. cruzi I. The epidemiological significance of the present results is discussed.

Se registró un caso infantil de leishmaniasis visceral procedente del caserío “Los Pozones”, municipio Buchivacoa ubicado al occidente del Estado Falcón, Venezuela, a finales del año 2002. Se presentan resultados de un estudio epidemiológico en la localidad, realizado durante el año siguiente a la detección del caso. El estudio incluyó un muestreo serológico a 110 humanos de diversos grupos etarios y a 10 perros, utilizando tres pruebas inmunodiagnósticas (TAD, IFI y ELISA). Además se realizaron capturas de flebotominos en refugios naturales y con trampa lumínica de Shannon cada dos meses durante un año, detectándose la presencia dominante de Lutzomyia evansi (62.7%) sobre Lutzomyia longipalpis (37.3%). La zona de vida donde se enclava la localidad rural estudiada corresponde a un bosque seco espinoso. El estudio serológico arrojó valores de seroprevalencia humana y canina para Leishmania del 17,3% y 50%, respectivamente. Estos hallazgos sugieren la existencia de un nuevo foco de LV en la parte occidental del estado Falcón, Venezuela, el cual requiere más investigación.

A case of visceral Leishmaniasis (VL) infection detected in a 10-year-old child from Los Pozones, a rural village located at Falcon State, Venezuela, is reported. The results of an epidemiological study carried out in the village during the 12 months following the case detection is presented. The study included a serological sampling in 110 out of 140 (78.5%) inhabitants of the village and 10 out of 38 (26.3%) dogs living under the same conditions. Three serological tests were used (DAT, IFAT and ELISA). Phlebotomine sand fly fauna was studied following collection on natural resting places and in Shannon light traps during 1 year. Results revealed a predominance of Lutzomyia evansi (62.2%) over Lutzomyia longipalpis (37.3%), the two major species found in the dry forest. In addition, 17.3% and 50% seroprevalence were detected in human and canine populations respectively. These findings suggest the presence of a new VL focus in the western part of Falcón State, Venezuela, where which much investigation is needed.

Tripomastigotes sanguícolas de Trypanosoma vivax y Trypanosoma evansi obtenidos de infecciones experimentales en ovejas y ratones respectivamente, fueron utilizados para purificar y caracterizar proteínas citosólicas mediante el método de partición con Tritón X-114. Los resultados revelan diferencias en los patrones proteicos entre las dos especies. Asimismo, las reacciones antigénicas mediante Western blot utilizando suero de animales naturalmente infectados, permitió discriminar las infecciones entre ambos parásitos. Se sugiere la utilización de esta metodología como una prueba diagnóstica confiable.

Trypanosoma vivax and Trypanosoma evansi blood trypomastigotes, obtained respectively from sheep and mice experimentally infected, were used to isolate and characterize proteins using the partition Triton X-114 method. Results showed a different protein pattern between the 2 species. Additionally, results by Western blot, using sera from naturally infected animals, revealed specific discrimination between these two species of Trypanosoma. The potential use of this method as a reliable diagnostic tool is suggested.

Tres pruebas serológicas (TAD, IFI y ELISA) fueron evaluadas en sueros de pacientes con Leishmaniasis cutánea Americana (LCA) en diferentes condiciones clínicas. Para este propósito se estableció como criterio diagnóstico la reactividad de al menos dos de las tres pruebas para declarar un individuo seropositivo. Previo a la realización de la serología, los individuos seleccionados fueron diagnosticados clínicamente (presencia de lesión=pl o presencia de cicatriz =pc), parasitológicamente (presencia de parásitos =pp), inmunológicamente (IDR) y molecularmente (PCR). Para la comparación estadística de las pruebas serológicas evaluadas fueron conformados 4 grupos constituidos por: 1. Pacientes con lesiones activas (n=44; pl, pp, IDR +, PCR+); 2. Pacientes cicatrizados recobrados de una infección por Leishmania (n=43; pc, IDR+, PCR+); 3. Individuos asintomáticos de áreas endémicas con evidencias de haber tenido contacto previo conLeishmania (n=40; IDR+, PCR+) y 4. Individuos negativos controles de áreas donde la Leishmaniasis es endémica y quienes vivían bajo condiciones de riesgo (n=104; IDR-, PCR-). Los análisis estadísticos de los resultados obtenidos utilizando las tres pruebas serológicas indicadas, revelaron valores muy bajos de sensibilidad, siendo de 50%, 9% y 12% para los grupos de pacientes con lesión activa (1), pacientes recobrados de infección previa (2) e individuos asintomáticos (3) respectivamente, con una especificidad general de 89%. Asimismo, fue detectado un bajo valor predictivo positivo (PVP=0,73); un bajo valor predictivo negativo (PVN=0,49) y un muy bajo valor de coeficiente kappa (k=0,114). Los resultados obtenidos en el presente estudio arrojan dudas sobre la confiabilidad de las tres pruebas de diagnóstico serológico evaluadas aquí para detectar LCA en cualquier condición clínica.

Three serological tests (ELISA, IFAT, DAT) were evaluated using sera from selected individuals with different American cutaneous leishmaniasis (ACL) clinical conditions. Reactivity in at least 2 of the 3 named tests was established as a criterion for declaring a patient as sero-positive. Prior to serological testing, people were diagnosed by clinical (presence of lesion = pl or scar=Sc), parasitological (presence of parasites =pp), immunological (LST) and molecular (PCR) methods. For a statistical comparison of the evaluated tests 4 groups of people were made up: 1) patients with active leishmanial lesion (n=44; pl, pp, +LST, +PCR); 2) patients who had recovered from leishmanial infection (n=43; Sc, +LST, +PCR); 3) asymptomatic individuals from endemic areas showing evidence of having contacted Leishmania-parasites (n=40; +LST, +PCR) and 4) Leishmania-negative people from the above localities where leishmaniasis is endemic and living under the same risk conditions, considered as healthy controls (n=104; -LST, -PCR). Considering the above-established criteria for sero-positives, the analysis of the results obtained with the 3 tests employed revealed very low sensitivity values. Seropositive figures of 50% were recorded for the first group, 9% for the second group, and 12.5% for the third group. Statistical analysis also revealed a low positive predictive value (PPV=0.73), a low negative predictive value (NPV=0.49), and a low kappa coefficient value (k=0.114). The present results raise questions about the use of the 3 conventional serological tests compared here to detect ACL at any clinical condition.

Se registra la detección de infecciones subclínicas por Trypanosoma vivax en bovinos asintomáticos de fincas ganaderas de Mérida, Venezuela. El diagnóstico fue realizado utilizando métodos parasitológicos (examen microscópico de muestra fresca, micro-capilar y láminas coloreadas); bioquímicos (Western blot) y moleculares (PCR) en muestras sanguíneas. Se advierte sobre el riesgo potencial que infecciones asintomáticas, ocultas o inaparentes pudieran representar para los rebaños bovinos. Se discute su significado y su importancia epizootiológica para regiones ganaderas del país.

Subclinic infections of Trypanosoma vivax were detected in symptomless animals from cattle farms in Merida, Venezuela. Parasitological (microscopical examination of: fresh, capillary tubes and stained slides-blood samples); biochemical (Western blot) and molecular (PCR) methods were used for diagnosis in blood sample. The significance, potential risk and epizootiological importance, are discussed.

The present article reviews the status of Chagas disease in Venezuela based on the detection of Trypanosoma cruzi infections both in referred patients with clinical presumptive diagnosis (1988-2002) and in individuals sampled from rural localities representative of the different geographical regions of the country (1995-2002). In the former group from 306 individuals examined, 174 (56.8%) were seropositive to T. cruzi; 73 (42%) in the acute phase with 52 (71%) showing blood circulating parasites, and from these 38% were children under 10 years old. The other 101 (58%) showed chronic infection at different degrees of cardiac complication. In addition, serologic examination of 3835 individuals from rural areas revealed 11.7% seroprevalence. From these, 8.5% (38/448) were children aged from 0 to 10 years old. These figures suggest that Chagas disease may be re-emerging in Venezuela judging for the active transmission detected during the last decade. The success of the Venezuelan anti-chagasic campaign during the last 40 years is evaluated in the frame of the present results. The epidemiological situation is discussed and recommendation to consider Chagas disease as a national priority is given.

A massive and homogeneous amount of amastigote-like forms was detected in the stomodeal valve (SV) and the thoracic mid-gut (TMG) of Leishmania major-infected Phlebotomus papatasi, which received a second blood meal 13 to 21 days post-infection on healthy anaesthetized hamsters. After re-feeding, the infected sand flies were dissected out to examine the morphology of the parasite in SV, TMG and the abdominal mid-gut (AMG). Different promastigote forms were seen in the infected flies. Among these included typical promastigotes (nectomonads and haptomonads), paramastigotes, metacyclic promastigotes and, in some samples, the here-reported amastigote-like forms. The Leishmania amastigote-like forms were detected in the SV of sand flies with 14, 18 and 21 days of infection as well as in the TMG at 13 and 18 days post-infection. However, the amastigote-like forms were not detected in the AMG. Factors such as the acidic pH predominating the TMG and the SV, as well as the temperature of the ingested blood, among others, are suggested as contributing to the transformation of the typical promastigotes into the amastigote-like forms. The significance of this finding is discussed and the possible biological advantage for transmission of Leishmania is considered.